細(xì)胞、組織、小鼠遺傳背景鑒定系列
對(duì)于支原體檢測(cè)，中國(guó)藥典推薦培養(yǎng)法，歐洲藥典推薦培養(yǎng)法和定量PCR方法。目前市面上常見試劑盒檢測(cè)原理包括化學(xué)發(fā)光法、普通PCR結(jié)合凝膠電泳、熒光定量PCR方法三種，前兩種方法靈敏度不夠，易出現(xiàn)假陰性結(jié)果；熒光定量PCR試劑盒多數(shù)是進(jìn)口品牌，價(jià)格昂貴。在此，我們?yōu)槟峁┬詢r(jià)比更高地新選擇——雙色熒光TaqMan探針定量PCR定制化檢測(cè)方案。
實(shí)驗(yàn)小鼠品系鑒定普遍采用單核苷酸多態(tài)性(SNP)遺傳位標(biāo)，國(guó)際著名的小鼠供應(yīng)商 Jackson Lab和Charles River分別選擇了29個(gè)和32個(gè)SNP來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)小鼠品系的鑒定。為了更加高效準(zhǔn)確地鑒別，我們從小鼠SNP數(shù)據(jù)庫篩選出相對(duì)均勻分布在20條染色體上的130個(gè)SNP位點(diǎn)，借助多重PCR擴(kuò)增建庫和高通量測(cè)序技術(shù)獲得SNP信息，再將這130個(gè)SNP分型信息比對(duì)小鼠SNP數(shù)據(jù)庫，來精準(zhǔn)鑒定小鼠的品系。對(duì)比所有近交系小鼠的SNP數(shù)據(jù)庫，該130個(gè)SNP分型信息可以準(zhǔn)確鑒別所有近交系小鼠。
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人源腫瘤異種移植模型(Patient-Derived tumor Xenograft, PDX) 是將病人的腫瘤組織直接移植到免疫缺陷鼠而建立的人源異種移植模型，是癌癥機(jī)制研究和藥物測(cè)試的有用工具，但隨著傳代次數(shù)增加，腫瘤組織保真度會(huì)逐步下降。轉(zhuǎn)錄組測(cè)序作為常規(guī)檢測(cè)手段，周期長(zhǎng)，成本高。為了更好、更快地評(píng)估小鼠細(xì)胞浸潤(rùn)狀態(tài)，我們?yōu)槟峁┮环N基于qPCR的高靈敏鑒定方案，2-3個(gè)工作日即可出具報(bào)告，提供定量檢測(cè)結(jié)果，檢測(cè)靈敏度可達(dá)到1%，可準(zhǔn)確指示組織中的小鼠細(xì)胞浸潤(rùn)比例。
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因每種動(dòng)物都具有各自特異的線粒體COI基因序列，因此利用COI基因序列進(jìn)行動(dòng)物種屬的鑒定成為一種標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)方案。我們采用PCR擴(kuò)增和一代測(cè)序技術(shù)獲得線粒體COI基因區(qū)DNA序列信息，并與數(shù)據(jù)庫比對(duì)進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘，通過遺傳進(jìn)化樹分析來鑒定動(dòng)物DNA樣本的種屬來源。
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對(duì)于細(xì)胞間細(xì)微的污染甚至種間細(xì)胞的污染（人源、小鼠、大鼠、倉鼠等），我們可以為您提供進(jìn)一步的鑒定方案——基于多重qPCR技術(shù)的高靈敏、多種系檢測(cè)方案。相較于STR鑒定方法（一般只能檢測(cè)占比15%以上的人源和小鼠細(xì)胞污染），該方案靈敏度和特異性更高，可以穩(wěn)定檢測(cè)出細(xì)胞中不同種屬來源、低至5%的微量細(xì)胞污染。此外，我們目前可以檢測(cè)多達(dá)10種不同種屬的細(xì)胞污染。
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利用熒光PCR擴(kuò)增小鼠基因組中9個(gè)STR基因座位，PCR產(chǎn)物在毛細(xì)管電泳分離之后可通過熒光檢測(cè)進(jìn)行基因分型。根據(jù)所得的STR分型結(jié)果與細(xì)胞STR數(shù)據(jù)庫(EXPASY)比對(duì)，從而鑒定樣品所屬的小鼠細(xì)胞系。技術(shù)服務(wù)團(tuán)隊(duì)開展此項(xiàng)業(yè)務(wù)近10年，實(shí)驗(yàn)團(tuán)隊(duì)與數(shù)據(jù)分析團(tuán)隊(duì)均具備豐富的經(jīng)驗(yàn)，已為上千家各類科研與工業(yè)客戶出具數(shù)萬份中、英文報(bào)告，獲得了普遍好評(píng)。
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細(xì)胞系的交叉污染影響到了科學(xué)研究的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。所謂細(xì)胞系鑒定即通過STR（Short TandemRepeat，短串聯(lián)重復(fù)序列）圖譜所建立細(xì)胞系的遺傳特征。一株細(xì)胞系的遺傳特征確立后，細(xì)胞系可以通過定期的檢測(cè)，以防止出現(xiàn)細(xì)胞系被誤認(rèn)或交叉污染的情況。由于STR技術(shù)的高靈敏度（最低可檢出0.1ng DNA）、自動(dòng)化程度高、準(zhǔn)確快速、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)， STR基因分型已被ICLAC、ATCC等權(quán)威機(jī)構(gòu)作為金標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用于細(xì)胞的“身份”鑒定。